Osnovni princip sinteze DNK

Hemijska sinteza DNK temelji se na strategiji sinteze u čvrstoj fazi i hemiji fosforamidita.Za razliku od biološke sinteze DNK, materijal u hemijskoj sintezi DNK je DMT (4,4-dimetoksitritil) i fosforamiditom modifikovani deoksiriboksizid, kao što je prikazano na slici 1. Sinteza DNK se vrši na čvrstoj podlozi (možemo ponuditi razneKolona oligosinteze), odnosno CPG (staklo s kontroliranim porama) i PS (polistiren), a cijela sinteza se izvodi naDNK/RNA sintetizator, koji je naša glavna oprema, ima različite modele kao što su: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 i sl., smjer sinteze je od 3' do 5', a nukleotid se uvodi u čvrsti nosač preko jednog ciklus sinteze.Tipičan ciklus sinteze sadrži četiri koraka, uklanjanje zaštite, spajanje, zatvaranje i oksidaciju (slika 2).Deprotection je podešen da ukloni DMT grupu na čvrstoj podlozi ili 5' hidroksilnu grupu na prethodnom nukleozidu, 3% trihloroctena kiselina u dihlorometanu se koristi kao reagens za uklanjanje zaštite.Zatim je fosforamiditom modifikovanom deoksiriboksizidu ostavljeno da izloži hidroksilnu grupu uz pomoć aktivatora, tj. 5-etiltiotetrazola ili 4,5-dicijanoimidazola, formirajući fosfitetrijester (III), i realizuje se korak spajanja.Korak zatvaranja se izvodi kako bi se blokirala neizreagirana hidroksilna grupa tokom koraka spajanja, kako bi se minimiziralo formiranje neželjenih defektnih sekvenci.Konačno, nestabilni fosfitetrijester (III) se oksidira u hemijski stabilan fosfortriester (V) sa jodom kao oksidansom u prisustvu piridina.

Sintetizirana DNK se može odcijepiti od čvrstog nosača aminolizom, 2-cijanoetil zaštićena grupa na fosfortriesteru i amid na nukleobazi se cijepaju u isto vrijeme, ploče za sintezu i kolone za sintezu u rešetkama se postavljaju direktno u reakcionu komoru of theOprema za uklanjanje zaštite.Sirova DNK se može pripremiti HPLC-om, elektroforezom i OPC na zahtjev, također vam možemo pružitiOprema za pročišćavanjeza naknadnu obradu.